丁酸氯维地平(Clevidipine butyrate)系第3代新型短效二氢吡啶类注射用钙通道拮抗剂，治疗不宜口服或口服无效的高血压患者，尤其是对手术期间血压急性升高的降压效果明显。地平类降压药是降压药中市场占有量最大、应用最广泛的药物，由于丁酸氯维地平受到专利限制(商品名 Clev-iprex，注射乳剂，上市时间为 2008 年 8 月，临床用于降血压，尤其适用心脏手术期间的血压急性升高)，国内外相关文献资料极少，国内外药典也均未收载丁酸氯维地平原料药有关物质分析方法。随着其专利期临近，国内外会有更多关于丁酸氯维地平的研究陆续开展。为规范丁酸氯维地平原料药的合成与使用，提高其相关制剂的安全性和有效性，笔者采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法检查丁酸氯维地平原料药中的有关物质，对丁酸氯维地平工艺中可能产生的工艺杂质和降解杂质等进行研究，并计算已知杂质相对于主成分的校正因子，最后以不加校正因子的主成分自身对照法来计算单个杂质和总杂质的量，从而为丁酸氯维地平原料药的质量控制提供依据。
1 材料
1.1 仪器
1200型HPLC仪，包括G1314可变波长检测器(VWD)、Chemstation 色谱工作站等(美国 Agilent 公司);BP-211D 电子天平(德国赛多利斯公司)。
1.2 药品与试剂
丁酸氯维地平对照品[简称对照品 A，4-(2，3-二氯苯基)-1-4-二氢-2-6-二甲基-3，5-吡啶二甲酸甲基(1-丁酰氧基)甲酯，批号：120929，纯度：99.6%]、样品丁酸氯维地平原料药(批号：20130801、20130802、20130803，纯度：99.90%、99.85%、99.90%)、杂质B对照品[4(-2，3-二氯苯基)- 2-6-二甲基-1-4-二氢吡啶-3，5-二羧酸单甲酯，批号：130311，纯度：98.7%]、杂质C 对照品[4-(2，3-二氯苯基)-2，6-二甲基-烟酸甲酯，批号：130112，纯度：99.1%]、杂质D 对照品[4-(2，3-二氯苯基)-2，6-二甲基-1，4-二氢吡啶-3，5-二羧酸二甲酯，批号：130429，纯度：98.4%]、杂质E对照品[4(-2，3-二氯苯基)-2，6-二甲基吡啶-3，5-二羧酸-3-丁酰氧甲基酯-5-甲酯，批号：130506，纯度：98.6%]、杂质F对照品[4-(2，3-二氯苯基)-2，6-二甲基-1，4-二氢吡啶-3-羧酸甲酯，批号：130303，纯度：99.0%]、杂质G对照品[4-(2，3-二氯苯基)-2，6-二甲基-1，4-二氢吡啶-3，5-二羧酸-3-丁酰氧甲基酯-5-乙酯，批号：130321，纯度：99.2%]、杂质H 对照品[4(-2，3-二氯苯基)-2，6-二甲基-1，4-二氢吡啶-3，5-二羧酸二丁酰氧甲基酯，批号：130402，纯度：99.3%]，均来源于上海信谊药厂有限公司;甲醇、乙腈均为色谱纯，磷酸为分析纯，水为去离子水。
2 方法与结果
2.1 溶液制备
2.1.1 系统适用性溶液。精密称取对照品A 20 mg，置于10ml 量瓶中，定量加入杂质 B～H 的对照品溶液(2.1.4项下溶液)1 ml，用乙腈溶解并稀释制成含丁酸氯维地平质量浓度约为2.0 mg/ml、各杂质质量浓度约为2 g/ml的溶液，即得。
2.1.2 供试品溶液。精密称取样品丁酸氯维地平原料药约20mg，置于 10 ml 量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，即得(2.0mg/ml)。
2.1.3 对照溶液。精密量取2.1.2项下供试品溶液1.0 ml，置于100 ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得1%对照溶液。
2.1.4 杂质对照品溶液。分别取杂质B～H对照品约10 mg，置于50 ml量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度;精密量取该溶液1.0 ml，置于10 ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，制成各杂质质量浓度为20.0 g/ml的溶液。
2.2 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Waters Symmetry ShieldTM(250 mm4.6 mm，5检测器为可变波长检测器(VWD);流动相：A 相为 20mmol/L 磷酸二氢钠水溶液(加 10 ml 四丁基氢氧化铵，制成1 000 ml，并用磷酸调pH=5.0)，B相为乙腈，梯度洗脱，流速：1.2 ml/min;检测波长：220 nm;进样量：20 柱温：35 ℃。
2.3 检查方法
取对照溶液20 l注入色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20%～25%。再精密量取对照溶液和供试品溶液各20 l，分别注入色谱仪中，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。扣除溶剂峰，与系统适用性色谱图中保留时间相对应，B～H杂质峰面积均不得大于对照溶液主峰面积的1/10(0.1%);其他单一杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1/10(0.1%);各杂质峰面积总和不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍(1.5%)。
2.4 专属性试验
取对照品A 20 mg，置于10 ml量瓶中，共6份，1份为未破坏，另5份分别按下列条件进行破坏。(1)高温破坏：在温度120 ℃ 烘箱中放置约 8 h。(2)光破坏(紫外灯)：在紫外灯(4 500 lx)中放置约15 d。(3)酸破坏：加1 mol/L盐酸1 ml，放置约8 h;用1 mol/L氢氧化钠1 ml中和酸。(4)碱破坏：加0.1mol/L 氢氧化钠 1 ml，放置约 8 h;用 0.1 mol/L 盐酸 1 ml 中和碱。(5)氧化破坏：加30% H2O2溶液1 ml后，在室温下放置约8 h。 取各破坏后样品溶液进样分析，结果未破坏及各破坏后样品的主峰含量分别为 100%、88.57%、93.76%、92.22%、91.53%、89.81%，主峰纯度分别为999.934、999.949、999.951、999.745、999.946、999.962。
3 讨论
3.1 建立丁酸氯维地平原料药中有关物质检查方法的意义
随着科技水平的提高，人们对药品质量、安全性的重要性有了更加充分的认识。而药物中的杂质与药品质量、安全性密切相关。目前国内对丁酸氯维地平研究重在合成工艺上，其有关物质的研究未见报道。笔者希望通过对有关物质的研究和质量控制，实现对丁酸氯维地平原料药的质量监控。
3.2 检测波长的选择
取丁酸氯维地平原料药、对照品及各杂质对照品各适量制备成对应溶液，分别在190～400 nm波长范围内进行紫外扫描。结果显示，各对照品均在220 nm波长具有大吸收，且丁酸氯维地平样品溶液在220 nm以外波长处并无更多杂质峰出现，故选择220 nm为检测波长。另外，用二极管阵列检测器检测各溶液，得到的吸收光谱也证实了样品和其各杂质在220nm 波长处均有最大吸收或较强吸收。
3.3 流动相的选择
试验中曾配制流动相使其pH接近2、磷酸二氢钠缓冲盐溶液溶度为60 mmol/L，虽然主峰与相邻杂质及杂质间分离度达到要求，但其对色谱柱损伤较大。后采用甲醇-乙腈(3∶2，pH=4)，但主峰与相邻杂质峰的分离度不佳。因此尝试降低其中甲醇比例。当缓冲液与甲醇比例达1∶1时，丁酸氯维地平与相邻杂质的分离度符合要求，但杂质E峰对称性较差，且杂质G保留时间太长(约60 min)。为使主峰和杂质B～H的峰均达到理想的分离度和良好峰形，且溶剂峰在220 nm波长末端吸收良好，经一系列的摸索，最终采用水相为20 mmol/L磷酸二氢钠、有机相为乙腈的流动相系统，梯度洗脱，结果满意。
综上，本方法简便、可靠、灵敏，不但可用于检查丁酸氯维地平原料药中有关物质的量，同时还可将各有关物质与主成分有效分离，故本法可以作为丁酸氯维地平原料药中有关物质的质量控制方法。
