一年蓬[Erigeron annuus(L.)Pers.]为菊科飞蓬属植物一年蓬的全草及根，又名女苑、野蒿、牙肿消、墙头草、长毛草、地白菜、治疟草、白旋覆花等，原产北美洲，在我国己驯化，主产于江苏、山东等地，多生于路边旷野或山坡荒地。一年蓬全草可入药，有治疟的功效，并有清热解毒，助消化的作用，主治消化不良，肠炎腹泻，传染性肝炎，淋巴结炎，血尿。研究发现，一年蓬中含有木犀草素、芦丁、槲皮素、芹菜素、芹菜素-7-葡萄糖醛酸苷等黄酮成分，黄酮类化合物具有抗癌、抗氧化、清除自由基、抗炎、抗病毒、降血脂、抗辐射等药理作用。
超高压提取是一种全新的天然产物有效成分提取技术，与传统提取技术相比较，具有操作简单、提取率高、时间短、杂质含量少、能耗低以及环保等优点。近年来，将超高压用于活性成分提取的研究报道较多，但尚未见用于一年蓬黄酮类成分提取的报道。本实验采用正交试验法，以总黄酮提取率及木犀草素含量为指标，研究一年蓬中黄酮类成分的超高压提取工艺，考察乙醇浓度、超高压压力、保压时间、固液比对黄酮类成分提取效果的影响。确定了一年蓬中黄酮类成分的最佳超高压提取工艺条件，对一年蓬的深入开发具有重要的意义。
1 仪器和试药
DL700 超高压等静压机(上海大隆机器厂);UV-1700 型紫外仪(日本岛津);LC-10AT型高效液相色谱仪(日本岛津);BS2010S型电子天平(北京赛多利斯天平有限公司);RE52-98 型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);SHZ-D(Ⅲ)循环式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂);恒温水浴锅(上海梅香仪器有限公司);ZK-82A型电热真空干燥箱(上海市实验仪器总厂);芦丁(中国食品药品检定研究院，批号为：100080-200707);木犀草素对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111520-200504);乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂皆为分析纯。
一年蓬药材采自吉林省烟筒山镇西大屯，经吉林省中医药科学院赵全成研究员鉴定为菊科植物一年蓬(Eriger⁃on annuus (L.)Pers.)。
2 方法与结果
2.1 总黄酮的含量测定方法
2.1.1 芦丁对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的芦丁对照品10.62 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇适量，溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得芦丁对照品溶液。
2.1.2 芦丁标准曲线绘制
准确吸取0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mL芦丁对照品溶液(0.1062 mg/mL)，分别置于 10 mL 容量瓶中，各加 30%乙醇补充至5 mL，加5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，摇匀放置6 min，再加入10%硝酸铝溶液0.3 mL摇匀，放置6 min，加入4% 氢氧化钠溶液2 mL，此时溶液呈红色，摇匀，加入30%乙醇至刻度摇匀，放置15 min，以相应溶剂为空白，在510 nm波长处测定吸光度，以吸收度为纵坐标，芦丁的量为横坐标，绘制标准曲线得回归方程为Y=0.02399X-0.024(r = 0.9998) 结果表明，芦丁在10.620～84.960g线性关系良好。
2.1.3 供试品制备
准确量取2.3 项下所制备的样品溶液1 mL至10 mL量瓶中，5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，摇匀放置6 min，再加入10%硝酸铝溶液0.3 mL摇匀，放置6 min，加入4% 氢氧化钠溶液2 mL，再加加入 30%乙醇定容至 10 mL，摇匀，在 510 nm 波长处测定吸光度，根据2.1.2项中得出的回归方程计算出样品溶液中总黄酮得率。
2.2 木犀草素的含量测定方法
2.2.1 色谱条件及系统适应性试验
Diamonsil(钻石)C18 5 m 2504.6 mm 色谱柱;流动相：乙晴-0.2%磷酸溶液(25:75);流速1 mL/min;检测波长350 nm;进样量20 L。
2.2.2 木犀草素对照品的配制
精密称取木犀草素对照品11.34 mg，置50 mL量瓶中，用甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密移取1.0 mL，置10mL 量瓶中，用甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2.3 供试品制备
精密吸取2.3项下所制备的样品溶液1 mL至10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。注入液相色谱仪测定其峰面积，计算木犀草素质量分数。
2.3 黄酮类成分的超高压提取
将一年蓬干燥后粉碎成40目粉末，精密称取粉末5.0 g，按L9(34)正交设计表分别进行超高压提取试验，因素水平表见表1，提取液过滤，合并，定容。用分光光度法测量吸光度计算总黄酮得率及注入高效液相色谱仪测定木犀草素质量分数。
2.4 验证实验
按正交实验所得的超高压最佳提取条件进行验证实验，安排 3 组实验。结果，总黄酮提取率分别为 0.923%、0.918%、0.941%，平均提取率 0.927%;木犀草素质量分数分别为：0.383 mg/g、0.391 mg/g、0.384 mg/g，平均质量分数为0.386 mg/g;表明此工艺合理，稳定，具有良好的重现性和可操作性。
3 讨论
本研究采用超高压提取一年蓬中黄酮类成分，以总黄酮提取率和黄酮类成分中木犀草素含量为指标，根据正交实验结果对一年蓬中黄酮类成分的超高压提取工艺进行了探讨，确定了最佳提取工艺。
超高压提取过程中，由于压力较高，大大加快了提取过程。在非常短的时间内，有效成分就能被完全提取出来，一年蓬中的黄酮类成分的提取时间仅为4 min，与传统的热回流法相比，大大缩短了提取时间，在中药的提取中具有很好的应用前景。此工艺的确定为进一步进行一年蓬黄酮类化合物分离纯化及开发提供了重要理论依据。
