试论参附注射液对阿霉素致心肌细胞钙超载的影响

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关键词： 参附注射液/药理学 阿霉素/毒性 钙超载 疾病模型 动物 大鼠

1 材料与方法 1.2 主要仪器与试剂 CK40型光学倒置显微镜 (日本Olympus)；ST4040型染色机(德国)；EG1160型石蜡包埋机(德国)；心脏Langendorff灌流系统由埃德仪器（上海）国际贸易有限公司提供；AXT0SK0P2型正置显微镜(德国ZEISS)；LP5150型TillVision图像处理系统（德国）；EPC9型膜片钳放大器（德国）；MP285型微电极拉制仪（美国）；Pulse＆Pulsefit和TAC数据采集和信号分析处理系统（德国）；阿霉素(浙江海正药业有限公司，批号20050507)；参附注射液(雅安3九药业有限公司，批号20043116)；牛血清白蛋白（BSA，Roche分装)；Ⅰ型胶原酶(Worthington，X6C8594，美国)；4羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPPS）、乙2醇2乙醚2胺4乙酸（EGTA）均购自Sigma公司。其他均为国产分析纯。 1.4 分组及给药 SD大鼠随机分为正常对照组，正常生理盐水组，阿霉素组，阿霉素加生理盐水组，参附注射液低、中、高剂量组（简称参附低、中、高剂量组）。每组8只，雌雄各半。正常对照组：不做特殊处理。正常生理盐水组：腹腔注射生理盐水。阿霉素组：实验开始后第2、4天腹腔注射1mg/kg ADR，第6、8天腹腔注射2mg/kgADR，第10、12天腹腔注射3mg/kgADR，第14、16天腹腔注射4mg/kgADR，16d累计用药剂量达20mg/kg；然后取左心室心肌组织，苏木素-伊红（HE）染色，镜下观察心尖处心肌细胞、细胞间质等的排列情况，确定造模成功与否。阿霉素加生理盐水组：造模后1周，腹腔注射等容积的生理盐水，每日1次，共2周。参附组：造模后1周，按高、中、低剂量组分别腹腔注射参附注射液0.3、0.6、1.2g/kg，每日1次，共2周。 1.6 钙浓度检测 将分离的大鼠心室肌细胞，以含钙1.0mmol/L的台氏液制备细胞悬液，贴壁于培养皿中，加入终浓度5μmol/L的荧光指示剂Fure2/AM负载，45min后以台氏液冲洗，然后在培养皿中加入有钙台氏液。将培养皿固定在荧光显微镜的载物台上，在TILLVISION中设置荧光激发方案，交替用波长340nm和380nm光波激发，曝光时间为40ms，每个循环之间时间间隔最短。用TILLVISION软件进行图像分析，记录340nm和380nm处荧光强度（F），除去自发荧光后计算出F340/F380比值，用此值代表细胞内游离钙离子浓度。细胞选取标准为杆状，细胞膜完整，横纹清楚，细胞内没有空泡及颗粒。 1.8 统计方法 采用SPSS 10.0统计软件进行分析。
2 结果
2.1 参附注射液对心肌细胞内游离钙离子浓度的影响 阿霉素造模后，阿霉素组及阿霉素加生理盐水组心肌细胞内游离钙离子水平较正常对照组显著升高(P<0.01)；参附注射液可显著降低心肌细胞内游离钙水平(P<0.01)，但各剂量组间未见显著性差异(P＞0.05)，结果见表1。
表1 参附注射液对心肌细胞内游离钙离子浓度的影响（略）
Table 1 Effect of Shenfu Injection on the free calcium concentration of the myocardial cells
统计方法：单因素方差分析；①P<0.01，与正常对照组比较；②P<0.01，与阿霉素加生理盐水组比较 表2 参附注射液对心肌细胞膜上L型钙通道的影响（略）
Table 2 Effect of Shenfu Injection on the Ltype calcium channel on myocardial membranes
统计方法：单因素方差分析；①P<0.05，②P<0.01，与正常对照组比较；③P<0.05，与阿霉素加生理盐水组比较
3 讨论
【参考文献】

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