两种凝血酶原提取方法的比较研究

毕业论文

【关键词】 凝血酶原； 凝血酶； 等电点沉淀法； 柠檬酸钡吸附法

Comparative Analysis of Two Extraction Methods of Prothrombin

LAI Yi,WU Minlu,DAI Juan,CHEN Man,DUAN Jiahui,LIU Yang* 毕业论文网 论文网

(Department of Lab Medicine,Chengdu Medical College,Chengdu 610083,China)

【Key words】 prothrombin； thrombin； method of precipitating at isoelectricpoint； adsorption method with barium citrate

1 材料与方法

1.1 材料

柠檬酸钠抗凝的新鲜猪血浆。

纤维蛋白原和凝血酶标准品购自美国SIGMA公司，Bradford蛋白质定量检测试剂盒购自美国BioRad。其余试剂均为国产分析纯。

1.3 主要仪器

GE GeneQuant 1300核酸蛋白分析仪。

1.4 方法

1.4.1.1 等电点沉淀法 猪血浆用蒸馏水稀释10倍，用5 %冰乙酸将其pH调至5.3，4℃静置过夜，3 000 r/min离心15 min，弃上清，沉淀用生理盐水溶解，过滤备用。

1.4.3 凝血酶比活性测定 根据文献［4］提供的方法配制0.1 %纤维蛋白原溶液。

根据文献［6］，采用Bradford法测定样品的蛋白质浓度，以牛血清白蛋白为标准品，每个样本平行测2次，取平均值。根据公式：酶比活性=酶效价/溶液蛋白质浓度，计算凝血酶溶液的比活性。

2 结果与分析

以凝血酶标准品溶液效价 (U/mL)为X，对应的凝固时间（sec）为Y进行直线回归处理，并求得直线回归方程，所得方程式为：Y=62.9135.994X，r≈0.994 8.将凝血酶样品的凝固时间代入回归方程，即可计算得出样品的凝血酶效价(见表1、图1)。

3 讨论

从血浆中提取的凝血酶可应用于临床，作为局部止血的首选药物，具有止血快、无副作用的优点。同时，凝血酶也是纤维蛋白原定量检测试剂盒的主要成分，应用于出凝血疾病和血栓性疾病的临床检测［7］。由于人血浆资源的限制性，目前国内采用猪血浆提取凝血酶的报道较多，等电点沉淀法和柠檬酸钡吸附法是两种主要的凝血酶原提取方法，凝血酶原经单独的钙离子激活即可得到凝血酶。表1 两种提取方法所得到的凝血酶比活性

等电点沉淀法根据蛋白质在溶

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