Wnt1诱导分泌蛋白1在直肠癌中的表达及其临床意义

毕业论文

【摘要】 目的 定量检测Wnt1诱导分泌蛋白1(Wnt1 induced secreted protein1，WISP1)基因在人直肠癌及远端正常直肠组织中的表达，为进1步研究该基因功能提供线索。方法 提取人直肠癌及癌旁正常直肠组织总RNA，采用实时RTPCR分析WISP1的表达，再对PCR结果进行分析。结果 WISP1 mRNA在直肠癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常直肠组织，差异有统计学意义(P<0.05)。WISP1的表达与肿瘤的分化程度、Dukes分期及淋巴结转移等因素有相关性。结论 WISP1基因的异常表达可能与直肠癌的发生、发展有关，有望成为直肠癌诊断预后的标志物和治疗的新靶点。

【关键词】 Wnt1诱导分泌蛋白1基因； 直肠肿瘤； mRNA

expression of Wnt1 induced secreted protein1 in rectal cancer and its clinical significance

【Abstract】 Objective To provide basis for further study of Wnt1 induced secreted protein1 (WISP1) gene by quantitatively detecting its expression in rectal cancer tissues and distal normal rectal tissues. Methods Realtime RTPCR was used to detect the expression of WISP1 mRNA in 86 samples of rectal cancer tissues and distal normal rectal tissues. Results The average level of WISP1 mRNA expression in rectal cancer tissues was 7.744 times than that in normal rectal tissues, with statistical significance (P<0.05). The level of WISP1 mRNA expression was correlated with tumor differentiation, Dukes stage and lymph node metastasis. ConclusionsThe abnormal expression of WISP1 gene may play an important role in the carcinogenesis and development of rectal cancer. WISP1 may be helpful for prognostic evaluation and gene therapy in rectal cancer.

【Key words】 Wnt1 induced secreted protein1 gene; Rectal caner; mRNA

1 材料与方法

1.1 标本取材

收集4川大学华西医院普外科2003-2004年确诊的86例直肠癌患者资料，其中男44例，女42例。各病例分别取直肠癌组织以及相邻远端正常直肠黏膜组织。组织在离体30 min内取材， 并于液氮速冻置于-70 ℃冰箱保存备用。所取标本均经病理检查证实。

逆转录酶MMLV为Takara公司产品； Trizol试剂为Gibco公司产品； DEPC、 DNaseⅠ、 RNase为Sigma公司产品；引物和探针由Takara公司合成。

1.3 总RNA提取及逆转录反应

1.4 实时RTPCR反应

1.5 扩增效率及产物分析

1.6 统计学分析

用相对表达软件工具XL［4］对RTPCR结果进行分析，揭示直肠癌组织及正常直肠组织两组间WISP1的表达是否有差异。利用SPSS 11.0软件包中Chi检验和秩和检验分析WISP1与临床病理指标之间的关系。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 总RNA电泳检测及定量

2.2 RTPCR扩增效率和线性关系

GAPDH及WISP1扩增效率分别是1.61及1.85。线性关系为r=1。

2.3 WISP1基因在直肠组织中的表达

86例直肠癌样本中有56例过度表达，其中有17例直肠癌中的表达是正常直肠组织的1～5倍，有5例是6～10倍，有34例是超过10倍。REST结果显示在直肠癌中WISP1的平均表达水平是正常直肠组织的7.744倍，两组表达量的差别有统计学意义(P<0.05)，说明WISP1基因在直肠癌中的表达上调。

2.4 WISP1基因水平与临床病理指标的关系

它与直肠癌的分化程度、Dukes分期及淋巴结转移有关，与年龄、性别及CEA等临床病理因素无明显相关性(表1)。表1 86例直肠癌患者Wnt1诱导分泌蛋白1表达水平与临床病理资料的关系（略）

3 讨论

【参考文献】
［4］Pfaffl MW, Horgan GW, Dempfle L. Relative expression software tool (REST) for groupwise comparison and statistical analysis of relative expression results in realtime PCR. Nucleic Acids Res,2002,30(9):e36.