浙江大学医学院附属妇产科医院教授 黄荷凤 金 帆 徐晨明
植入遗传学诊断（PGD）是一种将遗传病的诊断时间提前到胚胎植入子宫内膜之前的一种新型的产前诊断技术，即在体外受精（IVF）的胚胎中活检单个细胞进行遗传学分析后，再选择正常胚胎移植回母体子宫，以避免异常妊娠的发生。
前提 建立良好技术平台
为了顺利完成研究，我们课题组开发了用于染色体病PGD的FISH技术和基因病PGD的单细胞全基因扩增和单细胞PCR等技术平台。优化现有胚胎基因学诊断技术，提高PGD的准确率；开展了染色体病、囊性纤维病以及人组织相容性抗原HLA配型胚胎选择PGD的可行性研究；此外还研发了扩大染色体病PGD诊断范围的间期核转化技术和单细胞比较基因组杂交技术。
活检 必须极力保证胚胎安全
为尽量减少活检对胚胎造成的不良影响，提高胚胎活检的成功率，我们探索出一些技术经验，如活检胚胎应置稳定pH与渗透压的缓冲液中；采用Tyrode’s酸开孔法时，喷酸针内径应合适；采用激光开口法时，激光脉冲长度应合适，以免对附近的卵裂球造成不良的热效应；溶解透明带形成的开口大小约为所吸卵裂球的2／3，避免活检孔径过大而影响胚胎发育，或活检孔径过小而造成卵裂球吸出困难，甚至使卵裂球因局部受力过大而发生破裂。
难点 单细胞遗传分析模板制备
PGD的分析材料通常仅1～2个细胞，DNA的模板制备是PGD基因诊断的难点之一。单细胞操作不允许用苯酚、氯仿等抽提，以防微量DNA丢失。获取单细胞后，再将细胞的DNA或RNA分离出来。目前单细胞DNA较常用的分离方法有：液氮冻融煮沸裂解法、碱裂解法、蛋白酶K裂解法等。经过大量的研究比较，我们最终发现蛋白酶K裂解法温和，效果佳，是单细胞基因诊断模板裂解的首选。
此外，我们还进行了大量的相关研究，如单细胞染色体分析技术研究、微量模板的全基因扩增技术研究、人组织相容性抗原HLA配型胚胎选择PGD的可行性研究等。
目前国际上关于胚胎着床前HLA配型应用于脐血造血干细胞移植治疗的研究仅数例，我们也进行了该技术的探索。其中利用基因芯片技术对单细胞的HLA进行分型在国内外尚未见报道，为进一步探索利用基因芯片进行单个细胞HLA分型提供了崭新的线索。（李水根 孙美燕整理）
