张先生的爱人陈女士于近日在复旦大学附属肿瘤医院进行了乳腺癌根治手术。手术中,主刀医生告诉张先生,陈女士的冰冻病理诊断结果为恶性,但肿瘤具体的分类分期情况需要以术后的石蜡病理报告为准。焦急的陈女士多次催张先生去取报告,但病理科工作人员说:“病理报告不像B超报告,它做不到立等可取,一般需要4~5个工作日的时间。”每天,病理科接待窗口的工作人员,需要将这个问题解释很多遍。
一份病理报告的“出炉”需要经过技术处理和医师读片两大过程,而从一个手术中切下的组织标本到制成一张经过染色的病理切片,整个过程需要经过固定、取材、脱水、包埋、切片、染色、封片七大步骤。
第1天 固定标本
病理科医师接收手术室及时送来的新鲜标本,双人核对姓名、部位、标本件数。然后以最快的速度进行预处理并将标本放置在10%中性缓冲福尔马林固定液中,使组织结构得到充分固定。而遇到那些像大肠肿瘤、乳腺肿瘤等标本体积较大的组织时,要先切开标本或采用注射固定或灌注固定法。将固定液注入血管,经血管分支到达整个组织,从而得到充分的固定。
第2天 找病灶取材
待组织标本在固定液中浸泡8~24小时之后,便进入取材环节。医师需要在一大块组织标本中,找到那个躲藏于标本中直径可能只有几厘米、甚至几毫米的病灶。医师取材时不仅要保证组织标本完整精确,还要力争将组织块厚度控制在2~3毫米,长度小于8毫米。纵切或横切往往是全面呈现组织形态结构的关键。在实际操作中,对于空腔脏器,一般沿着其长径打开、取完整切面,这样才能完整保留组织结构的形态。
第3天 “加工处理”标本
病理科将完成脱水、包埋、切片、染色、封片工作。这一阶段基本上是技术环节的末了。脱水指的是组织标本经过固定后,为长久保存,必须将组织块内的不溶于石蜡等包埋物的水分置换出来,这一过程叫做脱水。通过不同浓度的乙醇进行梯度脱水,再利用二甲苯等透明剂将乙醇和水脱离组织,此过程可用全自动脱水机自控完成、常规过程需要12个小时。而后通过浸蜡使石蜡浸入组织中,取代组织中含有的透明剂。再者,将浸蜡后的组织置于包埋框中,注入融化的固体石蜡,石蜡冷却凝固后,组织即被包在其中,称之为蜡块,此过程也被叫做包埋。包埋需手工完成,技术员需了解组织块的情况,按照医生要求掌握好组织包埋的面和方向。待这些环节完成之后,技术员将蜡块固定在切片机上,手工转动切片机徐徐修整蜡块,切除组织边缘0.1~0.2厘米的余蜡以保证组织结构的平整,然后连续切片制成蜡带,再用眼科镊子镊起蜡带,轻轻平铺在40℃~45℃的水面上,借助水的张力和温度,并用镊子将略皱的蜡带一一撑开、展平。接着,将一片片蜡片捞起,平铺到载玻片的中段处,再置入60℃~65℃恒温箱内或切片漂烘温控仪的烘箱内烤切片30分钟,溶化并脱去组织间隙的石蜡。最后,对切片进行染色,常规使用的是苏木素-伊红染色法(简称H.E染色),染色后使组织中的嗜碱性物质染成蓝色,如细胞核中的染色质等;使组织中的嗜酸性物质染成红色,如多数细胞的胞质、核仁等。这将有助于病理医师在红蓝相间的世界中捕捉病变的诊断依据。
第4天 病理医师看片出报告
病理医师将在显微镜下对切片中透露出的蛛丝马迹进行诊断。之后还有报告发放的流程。一般而言,第四天病理科可以发出石蜡诊断报告。而对于一些疑难病例,病理医师可能需要通过特殊染色、免疫组化、分子病理、电镜等综合手段来明确诊断。同时,碰见因技术原因导致切片质量不佳影响诊断的情况,病理医师要求技术人员重新制片,以给出最为准确的诊断。如果遇到上述情况,诊断报告会推迟发出。(倪洪珍 王懿辉整理)