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芦笋组织培养时培养基配制

2018-12-31 14:42:10浏览:933评论:0 来源:山村网   
核心摘要:组织培养一般采用MS培养基。配制时首先将大量元素、微量元素、维生素及铁盐等配成母液。再将母液按顺序用吸管或量筒取出混合在一
组织培养一般采用MS培养基。配制时首先将大量元素、微量元素、维生素及铁盐等配成母液。再将母液按顺序用吸管或量筒取出混合在一起,加入到已溶化的琼脂及蔗糖液中,再加入定量所需水量和激素后即可分装到试管或三角瓶或培养瓶中,灭菌后使用。
(一)大量元素母液配制
硝酸钾KNO3 19000毫克
硫酸镁MgSO4·7H2O 3700毫克
磷酸铵NH4NO3 16500毫克
磷酸二氢钾KH2PO4 1700毫克
氯化钙CaCl2·2H2O 4400毫克
蒸馏水 1000毫升
配制时要注意药品先后顺序,否则因钙离子和磷酸根一起溶解时起反应产生沉淀。因此,应先将前4种溶解混合后加水到一定量,再加入氯化钙水溶液,最后定量加水到1000毫升即成。
(二)微量元素母液配制
硫酸锰 MnSO4·4H2O 2230毫克
硫酸锌 ZnSO4·7H2O 860毫克
硼 酸 H3BO3 620毫克
碘化钾 KI 83毫克
钼酸钠 Na2MoO4·2H2O 25毫克
硫酸铜 CuSO4·5H2O 2.5毫克
氯化钴 CoCl2·6H2O 2.5毫克
水 H2O 1000毫克
将上述药品分别先配成100倍液后再混合,最后加蒸水至定量1000毫升即成。
(三)维生素母液
甘氨酸 100毫克
盐酸硫胺素 20毫克
盐酸吡哆素 25毫克
烟酸 25毫克
肌醇 5000毫克
水 500毫升
这样配成后为100倍液,即将各成分溶解混合加蒸馏水定量至500毫升。
(四)铁盐母液
Na-EDTA 3730毫克
硫酸亚铁 FeSO4·7H2O 2780毫克
水 H2O 500毫升
分别溶解后混合再加蒸馏水定量至500毫升,配制培养基时,每1000毫升培养基加此液5毫升。
蔗糖的用量为每1000毫升加30克
琼脂的用量为每1000毫升加10克
生长调节素的应用 组织培养过程需在培养基中加入某一种或两种生长调节素,以提高愈伤组织形成新植株的生长。继代培养的速度及根系的生长的作用。植物生长调节素包括生长素如2,4D、萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)等;细胞分裂素如激动素(KT)、6-苄基氨基嘌呤(BA)、玉米素(ZT)、异戊烯嘌呤(2iP)等;赤霉素(G3);矮壮系(P333)等。
生长素的加入量一般都很少,需先配成一定浓度的母液。母液的配制需选择恰当的溶剂,如2,4-D、NAA、IAA及IBA是醇溶性的,因此要先用少量95%酒精溶解后再加重蒸馏水稀释到一定浓度。细胞分裂素如KT、BA、2iP及ZA等则需先用1摩尔浓度的盐酸或氢氧化钠溶解后再加重蒸馏水稀释到一定浓度后置冰箱中保存备用。而叶酸母液的配制则先用少量稀氨水溶解,然后再用重蒸馏水稀释。冰箱的温度调控在5-8摄氏度。但不论哪一种生长素的母液,在冰箱中都不能长期存放,一旦母液中出现沉淀或长出霉菌时,均不能再用,必须重新配制。
芦笋组织培养时常用的几种培养基配置成分及用量列于表9。实际操作使用时还可加入改进。
(责任编辑:豆豆)
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