猪瘟（classical swine fever，CSF），又称“烂肠瘟”，是由猪瘟病毒引起的猪的一种热性、致死性、高度接触性传染病，对养猪业影响颇大。1984年，国际兽疫局（OIE）将其列入A类传染病，我国目前将其定为一类传染病。根据多年的流行病学研究和文献资料表明，大、中型养猪场通过科学而有效的免疫接种程序所建立的猪群，在猪瘟流行时只引起猪瘟的散发。尽管实行科学的防疫制度，包括疫苗提高药量，但没有完全扑杀带毒猪，某些养猪场就成为猪瘟的疫源地。因此，要不断地学习和研究预防猪瘟科学的措施、方法，主要环节是提高防疫措施、诊断、接种后的免疫预防和评价。对此，养猪场迫切需要及时诊断猪瘟和定期检疫猪瘟，只有快速、灵敏、准确、便捷的临床与实验室诊断，有利于有效地控制和扑灭猪瘟，从而保护养猪业。1 临床诊断猪体温变化明显，迅速上升到41℃，少数达到42℃，稽留不退。食欲不振，其特征为病猪把嘴放在食物处片刻，又回到休息处。精神萎顿，伏卧嗜睡，后肢无力。先便秘后腹泻，以后交替发生，粪便中混有粘液或血丝。后期部分病猪有尿血、气喘等症状。急性结膜炎流出粘液或脓性分泌物，有些上、下眼睑粘在一起。常在鼻端、耳、四肢内侧、腹下有出血斑和出血点，指压不褪色。个别猪有神经症状：磨牙、痉挛、脚交叉、站立不稳。先天性猪瘟病毒感染可造成流产、木乃伊胎、畸形、死胎、有震颤症状的弱仔猪出生、或外观正常但生产出被感染的仔猪。全身性出血，皮肤、粘膜、实质器官都有充血和大小不等的出血点。淋巴结外观充血肿胀，切面周边出血，呈红白相间的“大理石样”。脾脏不肿大，边缘发现楔状梗死区。肾皮质色泽变淡，有点状出血。膀胱粘膜表现不同程度的充血，粘膜上有针尖大小的出血点。扁桃体出现梗死，随着细菌侵入发生化脓性炎症。肠道有不同程度的充血和出血，回盲瓣、回肠、结肠可见轮层状溃疡即“扣状肿”。公猪包皮积尿。根据以上临床症状、特征性病理变化，可以建立猪瘟的初步诊断，但应与猪丹毒、猪副伤寒、猪肺疫、猪弓形体和链球菌病等进行鉴别。2 实验室诊断根据临床症状、特征性病理变化，建立猪瘟的初步诊断，但确诊、非典型猪瘟，特别是仔猪表现的复杂症状，难以做出诊断，必须借助实验室诊断进行确诊，现在实验室诊断应用方法有动物试验、病毒分离、免疫荧光试验等。2.1 动物试验取病猪的扁桃体、脾脏、肾脏、淋巴结等组织（扁桃体是分离病毒首选器官，如采集不到扁桃体，也可采集脾脏、肾脏、淋巴结），剪碎、研磨，加生理盐水制成乳剂，无菌处理后接种易感猪，观察发病情况，然后分离病毒。中国兽医药品监察所建立用家兔代替易感猪诊断猪瘟试验（兔体免疫交叉试验），将病料乳剂接种健康家兔，7d用兔化猪瘟弱毒注射家兔，24h后每6h测温1次，连续3d。无定型热反应，说明病料中含有猪瘟病毒。2.2 病毒分离取病猪的扁桃体、脾脏、肾脏、淋巴结组织，加双抗后磨成乳剂，过滤、离心后取上清液，接种PK-15、PK-2a、ST等细胞进行病毒分离。Moormann等用SK-6细胞培养克隆化的猪瘟病毒，获得高效价的猪瘟病毒，并提取猪瘟病毒的RNA，建立猪瘟病毒的cDNA文库，完成Alfort株、Brescia株的全基因序列分析。2.3 免疫荧光试验用冰冻切片或细胞触压片进行直接或间接荧光抗体染色，也可先将病料乳剂接种于细胞培养后，再用荧光抗体检测感染细胞，能直接检出感染细胞中的病毒抗原。此法方便快速、检出率高，许多国家将它作为执行猪瘟消灭计划的法定诊断试验。2.4 血清中和试验可以检测出猪体内的抗体，目前最常用方法是免疫荧光中和试验、PAV株中和试验。邵振华等利用免疫荧光中和试验，对70日龄65份、5～6日龄34份、7月龄44份的猪瘟非免疫血清进行猪瘟母源抗体检测，结果70日龄阳性率52.3%，到5～6月龄全部转为阴性。2.5 间接血凝试验操作简单，易制定，既可检测抗原，也可检测抗体，主要是监测猪瘟免疫抗体水平。李树春等将猪瘟兔化弱毒株细胞培养物浓缩纯化，致敏由戊二醛鞣酸处理的健康绵羊红细胞，制成冻干猪瘟间接血凝诊断液，用以检测血清中的猪瘟抗体效价。2.6 骨髓细胞学检查法病初取病猪胸骨的骨髓浆汁做成涂片，姬姆萨染色后镜检，出现副淋巴母细胞，确定病猪感染猪瘟病毒。2.7 酶联免疫吸附试验（ELISA）酶免疫分析技术是继荧光技术后发展起来又一先进诊断技术，其基本原理是特异性反应系统、间接放大系统和显示系统结合起来，用于检测抗体或抗原的一种免疫方法。Shannon等报道，在猪瘟感染前病毒血症产生时，采其血清进行ELISA检测猪瘟病毒，可做早期诊断，捕获ELISA能够检测2种不同猪瘟病毒株感染的病猪的血液和组织中的抗体。2.8 核酸探针杂交试验核酸探针技术以病毒RNA基因组为模板制备探针，在cDNA合成后进行Southern-blotting。这种方法特异性强、准确可靠，可用于不同毒株的分离和鉴定。Cruliere等、Dable等、Colijin等利用猪瘟病毒基因组RNA构建cDNA，与牛病毒性腹泻病毒进行序列分析，合成36个探针，按照它们在病毒基因组的位置，根据特异杂交带区别猪瘟病毒、牛病毒性腹泻病毒以及绵羊边界病病毒。2.9 反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）是以病毒RNA为模板进行反转录，再以PCR进行核酸扩增来检测猪瘟病毒。罗廷荣等应用RT-PCR对猪瘟诊断表明，RT-PCR技术可应用于临床诊断。Sand-Vik等和Glodrick等分别利用此法对猪瘟病毒进行检测，结果显示此法具有检出率高、特异性强，微量病料即可诊断，且具有生物安全性，无散毒的危险。作者单位：东北农业大学动物医学院牡丹江龙大股份有限公司摘自：《吉林畜牧兽医》
