本菌为需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基上易于生长，培养适宜温度为35度，PH值为7.2。
普通琼脂 形成光滑，微隆起，边缘整齐波状的中等大菌落。由于产生水溶性的绿脓素（呈蓝绿色）和荧光素（呈黄绿色），故能渗入培养基内，使培养基变为黄绿色。数日后，培养基的绿色逐渐变深，菌落表面呈现金属光泽。
普通肉汤 均匀混浊，呈黄绿色。液体上部的细菌发育更为旺盛，于培养基的表面形成一层很厚的菌膜。但广泛使用有效抗生素后筛选出的变异株常丧失其合成能力。
血液琼脂 由于绿脓杆菌能产生绿脓酶，可将红细胞溶解，故菌落周围出现溶血环。
