1.根据症状及流行情况进行初步诊断 在根据症状及流行情况进行初步诊断时,必须注意以下区别:
(1)以肠出血为主的草鱼出血病和细菌性肠炎病的区别 活检时,前者的肠壁弹性较好,肠腔内黏液较少;病情严重时,肠腔内有大量红细胞及成片脱落的上皮细胞。而后者的肠壁弹性较差,肠腔内黏液较多;病情严重时,肠腔内有大量黏液和坏死脱落的上皮细胞,红细胞较少。
(2)草鱼出血病和细菌性败血症的区别 前者主要危害草鱼、青鱼的鱼种;后者则危害团头鲂、鲫、鲢、鳙、鳜、加州鲈、黄鳝、草鱼、白鲳、银鲴、大口鲇等多种淡水鱼,且对鱼种,食用鱼均危害。
2.根据病理变化可做出进一步诊断 如患出血病的鱼,小血管壁广泛受损,形成微血栓,同时引起脏器组织梗死样病变;在肝细胞等的胞浆内可以看到嗜酸性包涵体;超薄切片用透射电镜观察,在胞浆内可以看到球形病毒颗粒;血液中红细胞数、血红蛋白量及白细胞数均非常显著地低于健康鱼;白细胞血式小,淋巴细胞百分率十分显著地低于健康鱼,单核细胞百分率则非常显著地高于健康鱼;血清谷丙转氨酶、异柠檬酸脱氢酶、乳酸脱氢酶活性增高;血清乳酸脱氢酶在近阴极处出现第六条区带;血浆总蛋白、血清白蛋白、尿素氮、胆固醇均降低等。
3.免疫学诊断 最后确诊需进行免疫学诊断,常用的免疫学诊断方法有:
(1)葡萄球菌A蛋白协同凝集试验 杨广智等1991年报道,该方法快速、特异、设备简单,适合基层单位检测。
(2)酶联免疫吸附试验(ELISA法) 闵淑琴等1986年报道,该方法灵敏、准确、特异,可用于做早期诊断。该方法的灵敏度至少比不连续对流免疫电泳法(DCIE)高400倍。中国科学院武汉病毒研究所已制成试剂盒,可供早期诊断用。
(3)斑点酶联免疫吸附试验(Dot—ELISA) 简称点酶法。邵健忠等1996年报道,该方法操作简便,不需要特殊的酶标仪;灵敏度高,比葡萄球菌A蛋白协同凝集试验的灵敏度高10倍,比常规酶联免疫吸附试验高20倍。在鱼已带毒,但尚未显症时即可检出。可用于早期诊断、检疫和病毒疫苗质量检定,是适合基层单位的快速、准确和易行的检测方法。
(4)逆转录聚合酶联反应(RT—PCR) 王铁辉等1997年报道,该方法是检测草鱼出血病灵敏(最小可检测到0.1皮克病毒核酸,1皮克=1×10-12克)、特异、快速而有效的方法,更适合于大批样本的检测。该法不仅能够检测发病期显症病鱼体内的病毒,而且能够检测发病前期及发病后期外表正常的病毒携带鱼中的病毒,预示可用于草鱼出血病的早期诊断。
(5)免疫过氧化物酶技术 刘荭等1995年报道,该方法快速、简便、灵敏度比较高,整个过程只需4-5小时。其特异性能满足早期检测和诊断的目的。