娃娃鱼人工繁殖由于诸多难题未解决，至今尚未实现苗种的规模化生产，其资源就难以得到保护、增殖和利用。十几年来，我们深入研究娃娃鱼生殖生理学、发育生物学、繁殖生物学等多学科知识，发现了其制约因素：一是雄性性成熟率低(主要是指精液质量差);二是雌、雄性腺发育不同步；三是用肉眼很难准确判断娃娃鱼性成熟。针对这些发育生物学难题，我们将娃娃鱼生殖生理学、繁殖生物学与现代生物技术、基因学、中医学、中药药理学、中药工程学、野生动物营养与饲料学等相关学科原理与技术进行整合，创新了娃娃鱼人工繁殖技术。这一创新技术主要包括仿娃娃鱼栖息环境、人工控温、控光培育亲体和投喂促进雌、雄性腺发育的中药“生精散”及“促卵泡汤专用配合饲料”等技术。这一创新技术实现了娃娃鱼苗种的规模化生产，为娃娃鱼商品化养殖及保护、增殖与利用提供了技术乎台。本文将翔实介绍娃娃鱼规模化繁殖技术。
1 亲体培育的生态环境
亲体培育的生态环境条件是关系到娃娃鱼的性腺发育是否成熟的重要因素。因而，建造与娃娃鱼在自然界栖息环境的仿生态环境及人工控温、控光、调节水质、投喂人工配合饲料是培育亲体的重要技术。
1.1水温
水温是娃娃鱼性腺发育的决定因素。水温的主要作用是刺激娃娃鱼下丘脑分泌释放因子到垂体前叶，垂体产生2种激素(LH、FSH)，这2种激素均能对精子和卵子的发生进行调节。水温还能促进亲体摄食，从而满足精卵细胞发育所需的营养物质。
水温在每年3~9月份控制在16~24℃。水温日变幅不要超过±1．5℃。
1.2光照
娃娃鱼有背光运动的习性，即怕光照。因此，亲体培育期间，光照要控制在300~5001x。也就是说，亲体培育要在暗光环境条件下进行。
1.3饲料
营养丰富的饲料是娃娃鱼性腺发育的物质基础。亲体培育期间，饲料中要求蛋白质含量为42％~45．3％，糖为10％~18％，脂肪为2％~3％，多维和矿物质为1．5％，其它为7％~12％，中药生精散和促卵泡汤2％~3％。饲料中蛋白质的氨基酸平衡极为重要，不容忽视。同时要依据亲体性腺发育不同时相，投喂添加含量不同的中药生精散和中药促卵泡汤的配合饲料，这是亲体培育的关
键技术。
1.4水质调节
亲体培育期间，要营造一个良好的水环境，这样有利于亲体健康生长发育。亲体池水质要求矿化程度高，硬度大，透明。pH为6．5~7．50山区可利用山泉水、溪流水培育亲体，平原则应用井水(曝气后)或自来水培育亲体。水质调节主要是勤换水、勤清污、勤消毒。
2 亲体培育
2.1亲体放养
娃娃鱼亲体放养主要有2种方式：一种是雌、雄混养；另一种是雌、雄单独放养。
2.2亲体培育
从我们20年来研究娃娃鱼繁殖技术中发现：雌性娃娃鱼性成熟率较高，怀卵量大；雄性娃娃鱼性成熟率低，只有26．2％，而这26．2％的雄性精液质量也并非全部合格。人工隧道、地下室等人工工程培育的亲体，雄性性成熟率较高，但雌性性成熟率反而较低。所以，娃娃鱼至今未能实现苗种的规模化生产。因此，培育出大量性成熟的亲体，是娃娃鱼苗种规模化生产的关键技术。
娃娃鱼性腺发育具有季节性周期的规律。每年3~4月份开始发育，7~10月份成熟。依据这一季节性周期规律，人工培育亲体主要包括冬季培育、春季培育、产前培育及辅以生理学方法培育。
2．2．1 冬季培育 冬季培育是指亲体产后体虚阶段。这一阶段亲体培育的主要目的是给娃娃鱼亲体补充大量营养物质，使其产后迅速恢复健康；其次是要加快精卵巢的退化与吸收，以便翌年精卵巢能正常发育。冬季培育主要工作是水温调控和投饵。水温调控分2个阶段：首先是将水温控制在18~23℃，使亲体大量摄食、恢复健康，然后是将水温降至10℃以下，使亲体进入冬眠，加速精卵巢的吸收与退化。冬季饵料投喂是以配合饲料为主，并且要在配合饲料中添加2％的赖氨酸和1％的多种维生素。
2．2．2 春季培育 春季是亲体性腺开始发育阶段，这一阶段亲体性腺发育特征是第Ⅱ期向第Ⅲ期转化的重要发育时期。此阶段亲体培育主要目的是促进亲体性腺发育，使其性腺早日转化到第Ⅲ期；其次则是投喂优质饵料，以满足亲体性腺发育所需营养物质。春季培育主要工作是调控水温、投饵、调节光照和调节水质。调控水温是指将水温调控在18~22℃，使亲体早开口摄食、性腺早开始发育；投饵则是投喂添加了促进娃娃鱼性腺发育中药的配合饲料。
2．3 产前培育
此阶段亲体性腺发育特征是Ⅲ期末向Ⅴ期初转化时期，是亲体性腺发育成熟的重要时期。因此，此阶段亲体培育的目的是培育出大量成熟的亲体，主要采用生态学和生理学方法进行强化培育。
生态学方法：野生娃娃鱼是在深山峡谷溪河有回流水和泉水的地方栖息的。因此，人工培育亲体时，必须要建造1个仿生态环境(有回流水、冒泉水)的洞穴。同时将光照调节到5001x。水温控制在亲体所需最佳生长发育范围18~23℃。
生理学方法：就是将促进亲体性腺发育的中药生精制剂注射到亲体内，促进亲体性腺发育成熟。娃娃鱼体内联结神经系统与性腺的脑垂体是生殖细胞发育成熟的重要器官。中药生精注射液能促进娃娃鱼垂体释放激素，提高娃娃鱼亲体性成熟率。
3 人工繁殖新技术
3．1 亲体选择
亲体性成熟特征：雄性泄殖孔隆起圈上小白点突出，内周边红肿可见。B超检查：精巢长达7~9cm，宽为1~2cm；精巢饱满，中间无沟表明成熟。
雌性腹部膨大、柔软和富有弹性o。B超检查：可见卵径6~7mm，卵巢呈单个链珠表明成熟。
3．2 人工催产
3．2．1 催产剂RES十LRH—A十DOM、LRH—A十HCG。
3．2．2催产剂量(按新标准)
雌性：RES十LRH—A十DOM4~10ug/kg； HCGl00~1500IU/kg LRH—A0．2~150ug/kg
雄性：上述剂量减半。
3．2．3 催产方法 亲体催产注射部位均为背部肋间，进针0．3～0．5cm。针头采用人用输液软塑料管针头注射，这种针头能防止注射亲体时摆动。
3．2．4 催产效应 亲体催产注射到产卵效应时间为4～11天，其中最佳产卵时间是4～6天。因此从催产后3天要有人值班，观察雌性亲体是否产有卵胶膜。
3．2．5 人工授精娃娃鱼人工授精采用干湿法，其操作步骤是：当发现雌性亲体产出卵胶膜后，应立即用手轻托卵带放入搪瓷盆中，另1人则将成熟好的雄性亲体捉起来，放入布担架内，用双手轻挤雄鱼腹部，见有乳白色精液时，则可将精液直接挤入卵带上，轻晃卵带盆，使卵受精均匀。15分钟后加入纯净水。再过20分钟后，将卵带盆的水换2次。最后将卵带放入小塑料篮中，悬浮于孵化池中，即进入孵化阶段。
4 人工孵化
4．1 孵化的生态环境条件
4．1．1 水温和水源受精卵孵化水温要求严格控制在20～22℃。水温日变幅不要超过土1.0℃。水源可用自来水、泉水(泉水先要放入蓄水池，后放入孵化池)、井水(要曝气后才使用)。泉水孵化易生水霉，因而用泉水孵化一定要提高泉水温度。
4．1．2 溶氧量 放受精卵的水体的含氧量不低于5mg／L。
4．1．3 光照 受精卵光照要严格控制在3001x左右。
4．2 人工孵化
受精卵主要用静水孵化和微流水孵化。静水孵化时，早晚要各换水1次。
孵化期间注意3点：一是控制好水温和光照；二是防治水霉，即孵化时定期用水霉净预防，浓度为0．5～0．8×１０－6，浸泡受精卵10分钟；三是防止胚胎“贴壳”，即定时轻翻动受精卵。
(430415 武汉开务技术有限公司娃娃鱼研究所)
