以鲢鲫为实验材料,采用TL型鱼类回避槽,对28种常用水产药物作鱼类回避指数的测定。按测定结果分类列出鲢鲫对这些药物的敏感性顺序,可供鱼病防治中合理选用药物参考。实验还通过组织学方法观察鲫鱼的味蕾组织在药物渗透下的结构变化,证实鱼类的味蕾具有对外界化学物质的感受功能,与回避反应有关。
一、试验材料
供试的鲢、鲫来自渔场的养鱼网箱内。鲢、鲫的平均体长分别为3.1厘米、15.0厘米,平均体重为0.61克、28.5克。试验前经室内驯养,试验时的水温21℃~26℃,pH值6.5~7.5,总硬度6~7。
试验装置采用TL型鱼类回避槽,常用的28种药物分三类,即灭虫药、灭菌药及清塘药,其中灭虫药有硫酸铝、福尔马林、硝酸亚汞、醋酸亚汞、硫酸锌、硫酸亚铁、西维因、敌百虫计8种。灭菌药有石碳酸、重铬酸钾、磺胺、磺胺甲基异恶唑、磺胺嘧啶、磺胺月米、漂白粉、黄连素计8种。清塘药有五氯酚钠、贝螺杀、氨水、砷盐、鱼藤酮、巴丹、苯胺、生石灰计8种 。
二、试验方法
试验药物的浓度用稀释法配制,先配贮备液,再稀释于40升以上的水桶内,并用同样器册的清水作为对照水源。调节试验槽流量,每组保持每分钟500毫升~600毫升的流量。
试验分两组:一组直接观察、记录试验鱼对不同药物的行为反应情况;另一组结合观察鱼体表(特别是鳃部)的车轮虫活动情况。组织学检查取试验鲫的上颚及唇,于波恩氏液中固定,然石腊包埋切片,苏木精及伊红染色,显微镜摄影观察味蕾结构。
三、试验结果的数据处理
每次放鱼10尾于回避槽内,观察鱼的行为反应20分钟,记录在清水槽与药液槽中的游动状况及尾数,然后计算回避指数。
回避指数={(E—A)/T}*100%
E=进入清水槽内鱼的尾数
A=进入药液槽内鱼的尾数
T=进入两槽内鱼的总尾数
由以上计算结果表明:当鱼完全进入清水槽时,回避指数为100;若鱼完全进入药液槽时,回避指数为-100;鱼既不进入清水槽又不进入药液槽时,回避指数为0。
四、结果
鲢对28种药物的回避反应
本试验的结果显示,在鲢鲫对28种常用水产药物的回避反应敏感性不一,其强弱顺序如下:
灭虫药:硝酸亚汞、醋酸亚汞、硫酸铜、硫酸锌、福尔马林、硫酸铝、硫酸亚铁、西维因、敌百虫。
灭菌药:黄连素、重铬酸钾、磺胺、磺胺甲基异恶唑、磺胺嘧啶、磺胺、漂白粉、石碳酸。
清塘药:五氯酚钠、鱼藤酮、巴丹、苯胺、贝螺杀、氨水、砷盐。(见下表)。
鲫鱼味蕾细胞的组织学观察
鲫的味蕾呈卵圆形,直径大小不一,多数在18~28μm左右,梭形细胞的顶端有味毛和基部的神经未梢,专司感受外界环境中各种化学物质的功能。鲫在硫酸铜、硫酸锌及硝酸亚汞等药物离子的渗透下,味蕾组织、粘液细胞组织及其它表皮组织均受到不同程度的影响,从而导致反应迟钝,甚至迷途。
具体实验分为三步:
第一步:硫酸铜
1.浓度为0.001时, 经10分钟,细胞排列整齐,表皮细胞未见异常变化,经30分钟,上、下颌表皮细胞,未见异常变化,经60分钟,未见异常变化。
2.浓度为0.1时, 经10分钟,铜离子渗入上皮细胞中,少数味蕾出现水肿,经30分钟,表皮轻度受损,粘液的胞质及亚表皮受轻微损害,经60分钟,上皮细胞损害扩大,味蕾细胞出现空泡化。
3.浓度为0.5时, 经10分钟,表皮、亚表皮开始溶化,味蕾呈现糊化、萎缩,经30分钟,表皮开始脱落,味蕾萎缩加重,经60分钟,表皮细胞破坏,味蕾水肿扩大,空泡化增多。
第二步:硫酸锌
1.浓度为1时, 经10分钟,粘液细胞水肿,味蕾萎缩,发生空隙,经30分钟,表皮溶化,脱落,经60分钟,味蕾细胞空泡化增多。
2.浓度为3时, 经10分钟,表皮脱落,产生残缺,经30分钟,味蕾胞质被逐出,经60分钟,空泡连成大空隙。
3.浓度为8时, 经10分钟,表皮、亚表皮及肌层受破坏,经30分钟,表皮出现残缺,结缔组织受损,呈崩解,经60分钟,味蕾胞质均被逐出,呈空腔状。
第三步:硝酸亚汞
1.浓度为0.001时, 经10分钟,表皮细胞未见异常变化,经30分钟,细胞未见异常变化,经60分钟,细胞未见异常变化。
2.浓度为0.01时, 经10分钟,细胞未见异常变化,经30分钟,细胞未见异常变化,经60分钟,未见表皮细胞异变,粘液细胞未见异变。
3.浓度为0.5时, 经10分钟,味蕾的支持细胞呈黑色,细胞出现空泡化,经30分钟,味蕾细胞破坏,胞质被逐出,经60分钟,表皮细胞呈大裂痕,空泡也严重。
由本实验可见,在硫酸锌、硝酸亚汞浓度分别为每升8毫克与0.5毫克时,经60分钟,鲫的味蕾便受到严重损害,其胞质被逐出呈空泡化,以至失却正常的感觉功能。
讨论
试验表明,鱼类对各种药物的反应有很大差异,如对铜(硫酸铜)离子及黄连素反应较大,当水中铜、黄连素含量分别为每升0.51毫克与0.30毫克时,其回避率为98.5%和100%;浓度降至每升0.32毫克与0.20毫克时,回避率为80.1%与95%,其回避阈值低至每升0.001~0.01毫克范围。
鲢对灭虫药醋酸亚汞、硝酸亚汞,灭菌药黄连素、重铬酸钾及清塘药五氯酚钠、鱼藤酮的回避反应最强烈。