2004年4月8~15日我们分组在安徽省六安市南湖水域进行太湖新银鱼(以下称银鱼)人工繁殖,共采捕成熟(V期)亲鱼1 275组,16批,采卵126.3万粒,平均每尾产卵991粒,留盆观察3 000粒,进行不同人工授精方法及雌雄鱼不同配组对银鱼受精率影响的研究,放网箱5万粒,其余121万粒投放城东湖。
(一)材料与方法
1.亲鱼的采捕:采捕的时间为2004年4月8~15日,平均水温为14.6℃,每天上午和傍晚各采捕1次,每次作业时间1.5~3小时,采亲鱼用单船拖网捕捞,该拖网是一种无翼单囊中上层拖网,网口宽3米,高2米,全长10米,作业时用三角架把网口撑开,12马力拖带,船速每小时2千米,每隔15分钟采集1次。
2.亲鱼的选取与成熟鉴别:成熟的雌鱼臀鳍中部鳍条较雄鱼短,无臀鳞,腹腔中有透明的卵粒,腹部饱满,有明显的卵巢轮廓,轻压腹部即有卵粒流出;雄鱼臀鳍较大,臀鳍中的鳍条较长,有4~6根,特别粗长并弯曲呈波浪状,整个臀鳍呈扇形,基部两侧各有一列排列整齐的鳞片,前面鳞片大,后面鳞片小,选取雄鱼个体为5厘米以上。随机抽取其中9尾雌鱼进行性腺成熟度检查,见表1。
3.配组与授精:银鱼具有离水即死的特性,亲体不能长途运输,对捕获的成熟亲鱼,选择活体及死亡不久的鱼进行配组试验,雌雄比例按1∶3、1∶2、1∶1进行配组,采取干法和半干法人工授精。
(1)干法人工授精。雌雄鱼按1∶3配组,将亲鱼用干毛巾擦干,鱼卵挤入已擦干的表面皿中,再将雄鱼的精液挤到臀鳍上,用雄鱼的尾巴将精卵混合,1~2分钟后,加入清水,静置数秒钟,用水洗去多余的精液,除去杂物,装入大的杯中孵化,此方法同时进行雌雄鱼1∶3、1∶2、1∶1配组试验,其受精率对照情况见表2。
(2)半干法人工授精。雌雄鱼按1∶3配组,将擦干的雄鱼的精巢挑出,置入表面皿已置好的生理盐水中,用镊子捣碎,再将擦干的雌鱼卵挤入表面皿中,1~2分钟后用清水清洗,除杂后进行孵化。
(3)孵化方法。将受精卵置于40厘米×30厘米解剖盘中摊匀,每盘放卵5万粒,孵化期间每日换水2次,每次1/2,换水时不能将卵粒漂出,孵化过程中,1~2小时搅动1次,以增加水中溶氧,并不断用吸管吸去发白不透明或发霉的死卵。当胚胎发育至原肠中期后将各组卵分别倒入1 000毫升量筒内摇匀后,随机取样镜检统计受精率。
(二)结果 人工授精22小时后各组受精率统计结果见表3。
共获受精卵126.3万粒,采用塑料袋充氧外加包装纸箱汽车运输,每袋装受精卵10万粒,运程约2小时。投放地选择城东湖6个湖湾(龙泉湾、李桥湾、西大荒、陈塔寺、官庄、三流荻柴场),投放地均为水深1~2米,避风向阳,泥沙底质,间或有稀疏的水草,投放时先将装卵袋浸在湖中,待袋内水温和湖中水温基本一致后,将受精卵缓慢而均匀地倒入水中。
(三)分析与讨论
1.半干法人工授精的受精率明显高于干法人工授精的受精率。银鱼成熟个体较小,其精巢较小,干法人工授精中用手挤不能全部挤出精液,减小了精液的量,难以将精卵混合均匀,从而使部分鱼卵不能与精子接触,失去授精机会,另一方面,精子进入水体以后,其体内的渗透压高于水体的渗透压,需消耗大量的能量来调节渗透压,因此精子在水中的寿命较短,仅为20~30秒,30秒后大部分失去授精能力,卵子进入水体后其有效受精时间也明显地缩短,而在生理盐水(等渗液)中10分钟以上仍有受精能力,半干法人工授精是将精子放入等渗液中,其能量全部用于运动以延长寿命和活动时间,增加精子与卵子的接触机会,能大大提高受精率。
2.银鱼成熟度的好坏直接影响受精率,严格鉴定亲鱼成熟度是提高其受精率的重要措施。成熟度不高及过熟的卵子受精率很低,即使少数能受精,不久也会在胚胎发育过程中死亡,成熟度不好的亲鱼不能硬挤,否则影响受精率,操作时卵子一定要从泄殖孔挤出,从肚中挤出的卵不易受精,当水温达到10 ℃以后,成熟亲体所占比例可达40%,即可进行人工授精,高峰期以后捕获的未产个体往往发育较差,这类亲鱼卵巢难以从Ⅳ向Ⅴ期过度,此时进行人工授精则受精率下降,实践证明水温14~18℃最适宜进行人工授精。
3.从表2不同雌雄鱼配组受精率对照分析,1∶3、1∶2、1∶1组受精率分别相差 2.9、1.5个百分点,1∶3与1∶1组也只相差 4.4个百分点, 因此在较短的产卵高峰期内及有限的银鱼资源下制作大量的受精卵,在受精率相差不大的情况下,采用1∶1配组可获得较多的受精卵也是经济的,这样可以缩短精子在空气中滞留的时间以提高其授精的能力,对胚胎发育十分有利,而且可以降低劳动强度, 更合理地利用银鱼的资源。