在实际工作中时常需要在短时问内掌握种子批的生活力状况，如果此时种子处于休眠状态则难以通过发芽测定得到结果。种子生活力测定可以满足这一要求，四唑测定可以测定出休眠种子样品的生活力。四唑测定法于1942年由德国的莱康教授发明，随着四唑测定技术的发展，ISl、A(国际种子检验协会)于1950年成立四唑测定技术委员会。
1 生活力概念
种子生活力是种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力。
2 种子生活力测定的意义
2．1 可以测定休眠种子的生活力
新收获的或在低温贮藏处于休眠状态的种子，播种之前对发芽率低而生活力高的种子，对那些发芽率低和生活力也低的种子，仅用发芽试验测定其发芽率，就不可能测出种子的最高发芽率，就必须进一步测定其生活力，以了解种子潜在发芽能力。在实际工作中，如果发芽试验末期发现有新鲜不发芽的种子或硬实，进行生活力测定后，就可以根据具体情况做出破除休眠的处理，然后再做发芽试验。 。
2．2 快速预测种子发芽能力
休眠种子可借助于各种预处理打破休眠后，进行发芽试验，但时间较长；在种子贸易中，常因时间紧迫，采用正规的发芽试验来测定发芽率所需时间也较长，这时可用生物化学速测法测定种子生活力，为该批种子的质量状况提供参考依据
3 四唑测定适用的范围
四唑测定一般适用于下列情况：收获后需马上播种的种子；具有深休眠的种子：发芽缓慢的种子；要求估测发芽潜力的种子。另外，也适用于测定发芽末期个别种子的生活力，特别是怀疑有休眠时；测定已萌发种子，或收获期间存在的不同类型和加工的损伤(热害、机械损伤或虫蛀等)种子；解决发芽试验中存在的问题，如不清楚不正常幼苗产生的原因或怀疑杀菌剂的处理效果等。
4 四唑染色测定的原理
生活力测定是应用2，3．5一三苯基四氮唑(简称四唑，rITllC)无色溶液作为指示剂．这种指示剂是一种可被种子活组织吸收后，接受活细胞脱氢酶中的氢而被还原成一种红色的、稳定的、不扩散的和不溶于水的三苯基甲月替。据此，可根据胚和胚乳组织染色反应来区别有生活力和无生活力的种子。
5 四唑测定程序
5．1试验样品的来源数取
生活力测定的试样应从净度分析后并经充分混合的净种子中随机数取100粒种子2．4个重复或少于100粒的若干副重复：如果是测定发芽末期休眠种子的生活力，则可单用试验末期的休眠种子，也可以从送验样品中直接随机数取。
5．2种子预处理
在测定前，对所测种子样品需经过预处理(预措预湿)，其主要目的是使种子加快和充分吸湿，软化种皮，方便样品准备和促进活组织酶系统的活化，以提高染色的均匀度、鉴定的可靠性和正确性。
预措是指在种子预湿前除去种子的外部附属物和在种子非要害部位弄破种皮，如水稻种子需脱去内外稃壳，豆科硬实种子刺破种皮等。但须注意，预措不能损伤种子内部胚的主要构造。绝大多数种子不须进行预措处理，但有一些种子在预湿前要进行预措处理。
5．3 染色前的样品准备
为了使四唑溶液快速和充分渗入种子的全部活组织，加快染色反应和正确鉴定胚的主要构造，大多数种子在染色前必须采用适当的方法使胚的主要构造和(或)活的营养组织完全暴露出来。
5．4 四唑染色
四唑溶液必须完全淹没种子．溶液不能直接露光。因为光线可能使四唑盐类还原而降低其浓度，影响染色效果。
5．5鉴定前处理
为了确保鉴定结果的正确性，还应将已染色的种子样品加以适当的处理，再进一步使胚的主要构造和活的营养组织明显地暴露出来，以便观察鉴定。
5．6观察鉴定
测定结果的可靠性取决于检验人员对染色组织和部位的正确识别、工作经验和判断能力等综合运用能力。检验人员应按鉴定标准认真观察，确保鉴定结果的正确性。 ’，
6四唑测定的优缺点
6．1 优点
(1)原理可靠，结果准确。四唑测定主要是按胚的主要解剖构造的染色图形来判断种子的死与活。并且该测定技术已发展到成熟时期。标准发芽与四唑测定的对比试验表明，如能正确使用四唑测定方法．四唑测定结果与发芽率误差一般不会超过3％～5％
(2)不受休眠限制。四唑测定不像发芽试验那样通过培养，依据幼苗生长的正常与否来估算发芽率，而是利用种子内部存在的还原反应来显色来判断种子的死活，不受休眠的影响。
（3)方法简便，省时快速。所需仪器设备和物品较少，并且测定方法也较为简单，一般只需6～24 h．就能获得结果。
(4)成本低廉
6．2存在实践缺陷
(1)对种子检验员经验和技能要求较高。
(2)结果不能提供休眠的程度。
(3)处理种子不会像发芽试验那样能反映药害情
况。
