1、配制培养基。配方：⑴阔叶树木屑78%、麦糠20%、白糖和石膏各1%。⑵豆秸粉或玉米秆粉80%、石膏和白糖各1%、麦麸18%。⑶棉籽壳98%、石膏和白糖各1%。
2、装瓶灭菌。用罐头瓶、菌种广口瓶、酒瓶均可，但以用广口瓶种菌较好。如用酒瓶先将酒瓶颈部截去5-7厘米，将瓶刷净。然后装满培养料，塞好棉花球塞，棉塞上再包一层牛皮纸，高压灭菌一小时或用高压锅蒸6-8小时，取出送接种室降温后接种。
3、接种。在接种箱酒精灯火焰下接种，每瓶接入指甲大小猴头三级原种2小块，及时塞好棉花塞送至培养室培养。
4、培养菌丝。培养室培养加每层架30-40厘米，室内事先用30%的来苏水喷洒，或高锰酸钾和甲醛熏蒸，每立方米用甲醛10 毫米，高锰酸钾6克，混合后产生蒸气关闭门窗，将已接种的瓶，菌条摆在架上，室内保持20-30℃，空气相对湿度保持70%左右。约30天左右菌丝长满全瓶。培养菌丝时要遮光、室内有弱光即可。
5、培养发菌。当菌丝长满瓶子后要移到17℃-21℃的温度下培养10天左右长出菌蕾。猴头菇子实体即可由瓶口长出，瓶子竖放时每瓶距离3厘米，菌条可立式排放，瓶栽瓶子卧放依次叠起，每层瓶口方向要正反颠倒放置，因猴头菇出瓶以后，比瓶子粗得多，瓶口在一个方向会造成互相挤压，影响质量。室内温度如超过21℃，要采取降温措施，如通风、洒水，置冰块等。空气相对湿度控制在85%-90%，每天用喷雾器在室内喷3-4次，室内要遮光，同时要有良好的通风。采收当子实体全开始散发孢子，颜色清白，直径达7-10厘米时要及时采收。用小刀从瓶口内切下，蒂不要留得太长，以免引起杂菌感染。采收后保鲜不可超过12小时，也可晒干或60℃烘干，再用双层塑料袋贮藏。
